محمد اصفهانی متولد سال ۱۳۴۵ در تهران است.
 پدر او اهل اصفهان و مادر وی اهل تهران است. او پیش از این که به خوانندگی روی بیاورد قاری قرآن بود و در مسابقات قرآن قبل از انقلاب در رده نوجوانان مقام کسب کرد. به خاطر کسب مقام در مسابقات قرآن قرار شد به کویت اعزام شود که این سفر به خاطر مخالفت مادرش لغو شد.
او در ۱۲ بهمن سال ۵۷ برای تلاوت قرآن هنگام  ورود امام خمینی (ره)به فرودگاه مهرآباد انتخاب شد.
وی فارغ التحصیل رشته دکترای پزشکی از دانشگاه تهرانا ست.
اصفهانی بواسطه دایی‌اش به محمدرضا شجریان معرفی شد و موسیقی ایرانی را نزد شجریان و شاگرد وی علی جهاندارآموخت. سپس از استادانی چون همایون خرم، فریدون شهبازیان و بابک بیات در زمینه تصنیف‌خوانی و ترانه و زیبایی‌شناسی در الحان موسیقی ملی ایران بهره برد.
«آوای فاخته» اولین سریالی بود که تیتراژش توسط اصفهانی اجرا شد
این هنرمند خط بسیار خوشی دارد و چند سالی را هم در رادیو بواسطه شغلش نویسندگی كرد.
محمد اصفهانی سابقه همکاری با موسسه آفرینش های هنری آستان قدس رضوی در زمینه خواندن صلوات خاصه امام رضا علیه السلام را دارد.